博雅年级高二下暑假作业

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(14分,除注明外每空1分)科研人员构建了整合酶(phiC31)基因表达载体和含有2个相向排列的attB位点和attP位点的红色荧光蛋白(DsRed)报告基因表达载体,分别如图1和图2所示。phiC31能特异识别attP位点和attB位点,并从两位点各自的位置处切割双链DNA再重组,形成attL位点和attR位点,如图2所示。phiC31不能识别attL位点和attR位点。已知相关基因和载体中只含图1所示的限制酶识别序列。回答下列问题。 (1)可从______中查询phiC31基因的编码序列,再利用PCR获取phiC31基因。在PCR反应缓冲液中一般要添加Mg²⁺,其作用是______。 (2)为构建如图1载体所示的phiC31基因表达载体,可在R₁引物中引入______酶切位点;将PCR产物进行双酶切后,可对限制酶Kpn I切开的黏性末端的单链进行______处理后才能在DNA连接酶的作用下与EcoR V切开形成的平末端相连接。 (3)据图1分析,重组载体1中______酶(填“BamH Ⅰ”或“Sau3A Ⅰ”或“EcoR V”)的识别位点最多,其数量至少为______个。 (4)已知家蚕细胞中不存在phiC31基因和attP、attB位点,将报告基因表达载体单独成功转入家蚕细胞未观察到红色荧光信号,而phiC31基因表达载体和报告基因表达载体共同成功转入后则可观察到红色荧光信号。说明在家蚕细胞中,phiC31催化2个相向排列的attB位点和attP位点之间的DNA序列发生了______,该过程不可逆的原因是______。 (含图)